EAT. چودینوف ، V.A. پلوټوف ، A.V. الیګزانډرووا ، ایس. این. ایلانسکي
دا په دې وروستیو کې ښودل شوې چې د ascomycete فنګس Ilyonectria کراسا د کچالو تیوبرونو اخته کولو وړ دی. دا کار لومړی دی چې بیولوژیکي ځانګړتیاوې تحلیل کوي او د I د کریسټا فشار فشار ځینې فنګسایډونو پروړاندې مقاومت. د "کچالو" فشار د ډولونو مشخص ځایونو لړۍ د هغه چا سره جوړه شوې چې دمخه یې د فنګسي لپاره ترلاسه شوي چې د دافودیل ، جینسنګ ، اسپین او بیچ ، للي بلبونو او ټیلیپ پا leavesو له جلا کیدو څخه جلا شوي. په ښکاره ډول ، ډیری ځنګلي او باغ لرونکي نباتات د I کریسا زېرمې کیدی شي. تفتیش د ټماټو او کچالو سلیسونه تاثیر کړل ، مګر د ټماټو بشپړ میوه او د کچالو کچالو په ناروغۍ اخته نه کړه. دا په ګوته کوي چې I. کرسا د زخم پرازیت دی. په مغذي توکیو کې د فولډیو آکسونیل ، ډایفونوکونازول او ایزوکسټروبین پر وړاندې د مقاومت ارزونه د دې درملو لوړه موثریت ښیې.
د EC50 شاخص (د فنګس وژونکي غلظت ، کوم چې د غیر فنګس وژنې کنټرول سره په پرتله د کالوني د راډیټالي ودې نرخ دوه ځله سست کیږي) د 2 سره مساوي و؛ په ترتیب سره 0.4 او 7.4 ملی ګرامه / l. د I. کراسا لخوا رامینځته شوي د ناروغۍ پراختیا احتمال باید په پام کې ونیول شي کله چې د کچالو تیوبرونو فایټوتولوژیکي ارزونه او د نباتاتو محافظت تدبیرونو پرمختګ.
د فایټوپیتوجینک مایکروګانیزمونو وده د کچالو د کرلو او ذخیره کولو ټولو مرحلو کې د لوړ زیان لامل کیږي. کله چې د محافظتي تدبیرونو پلان کول ، د یوې قاعدې په توګه ، پیژندل شوي وژونکي درمل په پام کې نیول شوي ، لکه د الټیناریا ، فوساریوم ، فوما ، هیلمینتسپوریم ، کولټېټریچم ، فایپوتهورا ، او نور ډولونه. په داسې حال کې چې په وروستي کلونو کې ، په پوټکو کې د نوي فایټوپیتوجیک مایکروګانیزمونو ظهور په اړه ډیر راپورونه خپاره شوي دي. د دوی بیولوژي خورا لږ مطالعه شوې ، د دوی په تړاو په کچالو کې کارول شوي فنګسیز موثریت نامعلوم دی ، د تشخیص میتودونه ندي رامینځته شوي. د لوی پرمختګ سره ، دوی د پوټکي فصل ته د پام وړ زیان رسولو وړ دي. د دې مایکروجنیزمونو څخه یو د اساییومیسیټ فنګس Ilyonectria کرسا (Wollenw. A) کبابیل او کروس دی ، لومړی د کچالو په تیوبرونو کې د لیکوالانو لخوا کشف شوی (Chudinova et al. ، 2019).
دا کار د I. کراسا فشار د تحلیل پایله وړاندې کوي د کچالو تیوبرونو څخه جلا. د استعماراتو مورفولوژي او د I کریسا میسیسییل جوړښتونو ، د نوع ځانګړو DNA ساحو نیوکلیوټایډ تسلسل ، کچالو او روميانو ته ویروس ، او د ځینې مشهور فنجي وژونکو مقاومتونو مطالعه شوې.
مواد او دودونه
موږ د I کریسا 18KSuPT2 فشار استعمال کړ چې په 2018 کې د کوسټروما په ساحه کې کرل شوي د کچالو کچالو څخه اخته شوی ناروغ څخه جلا شوی. تیوبر د وچ روټ ډول سره اغیزمن شوی چې د سپک نسواري مایسییلیم پوښل شوي قهوه سره. د تعقیم اختلال کولو سایې کارولو سره ، فنګس میسیلیم د اګر مینډیم (د بیر بیرټ 10، ، ایګر 1.5، ، پینسلین 1000 U / ml) سره د پیټری ډش کې لیږدول شوی. پلیټونه په 24 ° C کې تیاره کې غوړ شوي و.
د آی سي سي 2500 ایچ ډي ډیجیټل کیمره او د لایکا M50 دوربین مایکروسکوپ سره د آی سي 80HD ډیجیټل کیمره (لییکا مایکرو سیسټم ، جرمنی) سره د لییکا DM80 سپک مایکروسکوپ د عکسونو ، بواسیرو او عضلو غړو اندازې او مورفولوژي ارزولو لپاره کارول شوي.
د DNA ګوښه کولو لپاره ، فنګس میسیلیم د مایع وچو کې وده شوې ، بیا په مایع نایتروجن کې منجمد شوی ، هوموجینز شوی ، د CTAB بفر کې غوړ شوی ، د کلوروفورم سره پاک شوی ، او د 2 alcohol الکول سره دوه ځله مینځل شوی.
د DNA استخراج طریقه په تفصیل سره د کوتوزووا ات ال لخوا په مقاله کې تشریح شوې. (2017).
د مالیکولر میتودونو له مخې د نوعاتو مشخص کولو لپاره او د I پیژندل شوي کراسا سټرینونو سره پرتله کولو لپاره ، PCR د پریمرونو سره ترسره شوی چې د ډولونو ځانګړي DNA ساحو ته وده ورکړې: ITS1-5,8،2S-ITS5 (پرائمر ITS4 / ITS1990، سپین او نور.، 2)، ژن ځایونه b. -ټوبولین (Bt2a / Bt1995b ، شیشه ، ډونالډسن ، 1) او د ژباړې اوږدولو فکتور 1α (tef1α) (پریمر EF728-1F / EF986-1999R ، کاربون او کوهن ، 3.1). د مطلوب اوږدوالي امپلیکونونه د ایروګین کلین اپ کټ په کارولو سره له جیل څخه ایستل شوي وو. پراخه شوې سیمې د BigDye® ترمینر v3730 سایکل سکوینګز کټ (پلي شوي بایو سیسټم ، CA ، USA) په پلي شوي بایو سیسټم 6 xl اتوماتیک تسلسل (د پلي شوي بایو سیسټم ، CA ، USA) په کارولو سره ترتیب شوي. د نیوکلیوتایډ پایلې د متحده ایاالتو د بایو ټیکنالوژۍ معلوماتو ملي مرکز (NCBI) د GenBank ډیټابیس کې د میچ لپاره د لټون لپاره کارول شوي. د فایلاژیک تحلیل د میګا 2013 برنامه په کارولو سره ترسره شوی (تامورا او نور. ، XNUMX).
د ویروس تشخیص د لوی غوړ شوي روميانو (ډول ډوبراوا) او د کچالو تیو (ګلا ډول) ټول شنه میوو کې ترسره شوی. سربیره پردې ، زیانمن شوي میوو او تیو ته د زیان رسولو لپاره ، موږ د ورته میوو او تیوبرونو ټوټې وکارولې. د تیوبرونو ټوټې په مرطوب چیمبرونو کې ځای په ځای شوي و ، کوم چې په لاندې کې د لوند فلټر کاغذ سره د پیټری پخلی شوی و. په کاغذ کې یو سلایډ ایښودل شوی و ، په دې پایله کې ، د تیوبرونو یا میوو ټوټې کیښودل شوې وې. بشپړ تیوبر او میوې هم په کڅوړو کې د لوند فلټر کاغذ سره ځای په ځای شوي وو. د سلایش په مرکز کې (یا د تیوبر یا میوې په ثابتې سطحې) کې ، د ایګر یوه ټوټه (5 × 5 ملي میتر) د فنګل هایفي سره په وریټ ایګر کې د نمو له 5 ورځو وروسته ځای په ځای شوی و.
فنګسیډونو ته د فنګس سټینونو مقاومت ارزونه د ایګر مغذي درملو په لابراتوار شرایطو کې ترسره شوې. موږ د فنګسایډل درملو لپاره حساسیت مطالعه کړی ماکسیم ، KS (فعال اجزا فولیووکسونیل ، 25 g / l) ، Quadris ، KS (Azoxystrobin 250 g / l) ، Scor، EC (difenoconazole 250 g / l) (د ریاست کتګال ... ، 2020). ارزونه د پیټري برتن کې د واټ - ایګر مینډیم کې ترسره شوې چې د مطالعې شوي درملو اضافه کولو سره د فعال مادو په غلظت کې 0.1. یو؛ 1 پی پییم (مګرا / ایل) (د فولیو آکسونیل او ډایفونوکانازول لپاره) ، 10؛ لس؛ 1 پی پی ایم (د ایزوکسایټروبین لپاره) او په میډیا کې پرته له فنګسایډ (کنټرول) څخه. فنګسایډ په خټکي او 10 ° C درملو ته اضافه شوي ، وروسته لدې چې مینځنۍ د پیټری پخلي کې اچول شوې. د فنګل میسیلیم سره یو ایګر بلاک د پیټري ډش په مرکز کې ځای په ځای شوی و او په تیاره کې د 100 ° C په تودوخې کې کلتور شوی و. د تخمدان 60 ورځو وروسته ، د استعمار ابعاد دوه په عمودي سرلیکونو کې اندازه شو. د هر کالوني لپاره د اندازه کولو پایلې اوسط وې. دغه تجربې درې ځله ترسره شوې وې. د تحلیلونو د پایلو پراساس ، EC24 محاسبه شوی ، د فنګسایډ غلظت سره برابر دی ، کوم چې د فنګسایډی کنټرول پورې اړوند د کالوني د راډیوي ودې کچه نیمه کړې.
نتیجه او بحث
د پیټري پخلي کې د واټ ایګر سره ، فنګس د سپینو فلوکولین میسیلیم سره استعمار جوړوي. د میسییلیم لاندې مینځ سور سور نسواري شوی. کله چې وچ وچ شي ، فنګس په کوچني sporodochia کې د دوه ډوله spores په واحد او مجموعي کونډیوفورسونو رامینځته کړی. میکروکونیدیا اوږد دی ، بیلتونیک دی ، له یو څخه تر درې سیټا پورې ، اوسط اوږدوالی 27.2 µm له 23.2 څخه تر 32.2 µm پورې پراخې ارزښتونو سره ، عرض - له 4.9 µm پورې (شکل 1). د مایکروکونډیا اوسط اوږدوالی 14.3 µm دی چې د 10.3 څخه تر 18.1 µm پورې د ارزښتونو لړ سره ، عرض یې تر µ.µ µm پورې دی. ټول میکرو- او مایکرو میکفورولوژیک کرکټرونه د Ilyonectria کرسټا (Cabral et al. ، 4.0) ډولونو کې توپیر لري.
د ډولونو ځانګړو DNA ساحو لړۍ (ITS ، b-tubulin، TEF 1α) په بشپړ ډول د I. کراسا فشارونو سلسلو سره همغږي وه چې موږ مخکې مطالعه کړې وه (Chudinova et al. ، 2019 ، جدول 1). په نورو سیمو کې د I کریسا پراخه مطالعه کولو لپاره او د اغیزمنو کلتورونو نظارت تحلیل لپاره ، د جنبینک ډیټابیس کې ورته DNA تسلسل تحلیل شوي (جدول 1). پراخه کچه له 86 څخه 100٪ وه. د "کچالو" I. کراسا فشار د دریو DNA ساحو لړۍ په نیدرلینډ کې د لیلب بلب او ناریسیسس ریښو او په کاناډا کې د ژینسیګ ریښې څخه د جلا کیدو وړ لارو ته ورته والی وې. موږ په نورو ډیټابیسونو کې د دریو تحلیلي ورته ترتیبونو سره د I. کریسا فشارونو په موندلو کې پاتې راغلو. په هرصورت ، د زیرمه شوي ITS او b-tubulin سلسلو تحلیل په انګلستان کې د Tulip پا onو کې I. کرسا شتون څرګند کړ. فنګي د ورته ITS ترتیب سره په کاناډا کې د ایسپین ریښو مایکوبایټا تحلیل او په ایټالیا کې د بیچ ریښو ، په سعودي عربستان کې د کچالو تیوبر (جدول 1) په ګوته شوي. د دې مطالعې پایلې ښیې چې I. کراسا نړیواله توزیع لري او د نبات مختلف ډولونو کې د ناروغۍ وړلو وړ دی.
کله چې په پنځمه ورځ د روميانو او کچالو په ټوټو کې د رنځ وړتیا وټاکئ ، نو د زخم قطر یې 5 سانتي مترو ته رسي .د تحقیق شوي فشار د ټماټو ټوله میوه او د کچالو کچالو ښه نده متاثره کړې. په هرصورت ، سیمال په ټماټر باندې اغیزه درلوده. د ککړتیا احتمال پریښودو لپاره ، د میتیلیم څخه یو فنګس جلا کول چې د کچالو تیوبر سلائس کې رامینځته شوي په خالص کلتور کې جلا شوي. دا په بشپړ ډول د مور او پلار فشار سره ورته و. په ښکاره ډول ، I. کرسا د ټپ پاراګاه ده.
د تخم تیو د کښت کولو دمخه درملنه د فنګسي موادو سره د کښت په موسم کې د بوټو ناروغیو وده کموي. د مؤثره فنګسایډونو انتخاب لپاره ، دا مهمه ده چې ارزونه وشي چې کوم یو د I په وړاندې اغیزمن دی. دې کار د فنجيسایډونو پراخه فعال مادې مطالعه کړې - فولیووکسونیل ، ایزوکسایټروبین ، ډفینکوونازول. فولډوکسونیل په کښت کولو دمخه په څو مرکباتو کې شامل شوي چې د تخمونو او تخم پوښونو لپاره جامې کارول کیږي. فولادوکسونیل (میکسم) د ذخیره کولو دمخه د تخم تیو درملنې لپاره هم کارول کیږي. ډایفونوکانازول او ایزوکسټروبین په یو شمیر چمتووالو کې هم شامل دي چې د تخم موادو پروسس کولو لپاره کارول کیږي ، او همدارنګه په هغه چمتووالی کې چې د نباتاتو بوټو پروسس کولو لپاره کارول کیږي (د ریاست کتګال ... ، 2020).
د I کراسا وده د میډیا (عکس 2) کې د فعال مادي بیلابیل غلظت سره مطالعه شوې: فولډیو آکسونیل (EC50 = 0.4 ppm) ، Azoxystrobin (EC50 = 4 ppm) ، او difenoconazole (EC50 = 7.4 ppm) (جدول 2). دا چمتووالي د I. کریسا پروړاندې خورا مؤثره ګ beل کیدی شي ، ځکه چې د دوی EC50 د تیوبرونو درملنې لپاره کارول شوي کاري مایع کې د چمتووالي وړاندیز شوي غلظت څخه د پام وړ ټیټ دی. د ریاست کتلاګ ... په وینا (2020) ، د کچالو تیوبرونو درملنې لپاره په مایع کې د فولډیو آکسونیل غلظت له 500 څخه تر 1000 پی پییم پورې دی ، ایزوکسایټروبین (د پزې د پای تداوۍ لپاره په مایع کې) - 3750-9375 پی پی ، ډیفینوناکازول (د حیواني نباتاتو درملنې لپاره مایع کې) - 187.5– 625 پی پی.
جدول 1. د نوعاتو ځانګړي ترتیب د ورته ډول ورته ډول 18KSuPT2 ډول او د Ilyonectria کریسا ډولونو په Genbank ډیټابیس کې شتون لري
فشار | کوربه نبات ، د سایټ کولو ځای | د تسلسل شمیره په GenBank کې زیرمه شوې ، د ورته ورته سلنه | مخونه | ||
د | tub-ټیوبولین | TEF 1α | |||
17KSPT1 او 18KSuPT2 | د کچالو تیوبر ، د کوسټروما سیمه | MH818326 | MH822872 | MK281307 | Chudinova et al. ، 2019 ، دا کار |
سي بي ایس 158/31 | د ناریسیوس ریښې ، هالنډ | JF735276 100 | JF735394 100 | JF735724 99.3 | کیبلال اوټ. ، 2012 |
سي بي ایس 139/30 | د لیلی بلب ، هالنډ | JF735275 100 | JF735393 99.7 | JF735723 99.3 |
|
د NSAC-SH-1 | جینسنګ ریښه ، کاناډا | AY295311 99.4 | JF735395 100 | JF735 / 725 99.6 |
|
RHS235138 | Tulip پا leafه ، انګلستان | KJ475469 100 | KJ513266 100 | ND | ډینټن ، ډینټون ، 2014 |
MT294410 | اسپن ریښې ، کاناډا | MT294410 100 | ND | ND | رمسفیلډ اوټ. ، 2020 |
ارکسومکس | بیچ ، ایټالیا | KR019363 99.65 | ND | ND | تزاني ، هاګي ، موټا. مستقیم سپارنه |
KAUF19 | د کچالو تیوبر ، سعودي عربستان | HE649390 98.3 | ND | ND | ګشګاري ، ګربوۍ ، 2013 |
ND = نه جمع کیږي
جدول 2. فنګسیس ته Ilyonectria کرسا مقاومت
(فعاله ماده) | EC50 ، ppm | ||||
د 3 ورځ | د 5 ورځ | د 7 ورځ | |||
کنټرولونه | 17 ± 2 | 33 ± 5 | 47 ± 3 | ||
Quadris ، KS (fsoxystrobin) | 18 ± 1 | 34 ± 2 | 48 ± 2 | ||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
میکسم ، KS (فولیو آکسونیل) | 16 ± 1 | 28 ± 2 | 48 ± 2 | ||
7 ± 1 | 13 ± 3 | 19 ± 4 | |||
5 ± 1 | 12 ± 1 | 17 ± 5 | |||
سکور ، EC (ډیسکانونازول) | 18 ± 1 | 35 ± 2 | 48 ± 1 | ||
11 ± 1 | 24 ± 3 | 35 ± 4 | |||
11 ± 1 | 13 ± 1 | 17 ± 3 |
زموږ په کار کې ، I. کریسا فشارونه د کوسټروما او ماسکو (Chudinova et al. ، 2019) سیمو کې د کچالو تیوبرونو څخه جلا شوي. د ISS تسلسل سره د فنجي تنایونو لوړه تناسب د I. کراسا سره راپورته شو کله چې په سعودي عربستان کې د کچالو تیوبرونو مایکوبایټا تحلیل وکړ (ګشګاري او ګیرباوي ، 2013). په څرګند ډول ، I. کراسا په کچالو کې دومره کم ندی چې داسې ښکاري. زموږ تجربو ښودلې چې فنګس کولی شي زیان لرونکي د روميانو میوې اخته کړي. دا د ادب څخه پیژندل شوي چې I. کراسا په خاوره کې د وړتیا وړ وده کوي (Moll et al. ، 2016) ، په بیله بیا د یو شمیر نباتاتو اغیزه کوي ، حتی د ټیکسونومیک لیرې ځایونه لکه ډافوډیلز ، لیلیز ، ژینسینګ ، اسپین ، او بیچ (جدول 1). یو). په ښکاره ډول ، ډیری ځنګلي او باغ لرونکي نباتات د I کراسا زیرمې کیدی شي. پورته ښیې چې کله د محافظت تدبیرونو رامینځته کول ، اړینه ده چې د دې فنګس سره د کچالو تیوبرونو اغیزې احتمال په پام کې ونیسو. د کچالو تیوبرونو د درملنې لپاره پراخه چمتووالی چې فولډیو آکسونیل ، ایزوکسایټروبین او ډایفونوکانازول لري د I کریسا پروړاندې د لوړ فنګسایډل اغیزمنتوب ښودلی.
دا کار د لومړني تحقیق لپاره د روسیې بنسټ لخوا ملاتړ شوی (د ګرانټ شمیره 20-016-00139).
مقاله په 2020 ، 103 (3) ژورنال "د نباتاتو ساتنې بلیټین" کې خپره شوې